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染色液使用时需要注意哪些要点？

更新时间：2022-10-20 点击次数：829次

　　染色液是一种间接的不含生物素的系统，用于检测鼠抗IgG、IgM和兔源性一抗。对常规经福尔马林固定，石蜡包埋的组织和冰冻组织切片中的靶抗原进行检测。

　　染色液的使用方法：

　　1.DAB显色液配制

　　10mMTris-HCl(pH7.6)9mL+DAB(diaminobezidin3，3-二氨基联苯胺)+0.3%(W/V)NiCl2或CoCl21mL,显色时加入5-10mL30%H2O2混匀后立即使用。

　　2.显色

　　准备好含有待测蛋白的固相膜：包括电泳、转印、封阻、一抗(或生物素)处理、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处理、清洗等步骤。

　　3.加入适量的DAB显色液，铺满整个固相膜表面(可按比例增减)。

　　4.置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分钟，避免光照(暗室操作)，直至棕褐色沉淀出现。

　　5.用镊子夹起固相膜，放进无离子水里清洗。

　　6.空气中晾干。

　　7.拍照记录。

　　染色液的使用注意事项：

　　1.DAB有潜在致突变作用，操作时应注意穿戴好防护用具。

　　2.DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出，应确保结晶*溶解再行使用；

　　3.显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用；

　　4.DAB在常温下不稳定，每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱，以免因DAB分解影响实验，或因渗漏造成实验环境污染。

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