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使用染色液前需清楚其的操作方法及注意事项
发布时间:2018-08-29   点击次数:133次
     染色液溶于水,微溶于乙醇。水溶液显酸性。在实验室,草酸铵可以和溶液中的钙、镁等离子生成沉淀,用过滤的方法除去溶液中的钙、镁离子。染色液用于免疫组化染色,应用在Dako 自动染色系统上。
  染色液的使用方法:
  1.显色液配制
  10mM Tris-HCl (pH7.6)   9mL  +DAB (diaminobezidin 3,3-二氨基联苯胺) +0.3%(W/V)  NiCl2 或CoCl2   1mL ,显色时加入5-10mL 30%H2O2 混匀后立即使用
  2. 显色
  准备好含有待测蛋白的固相膜:包括电泳、转印、封阻、一抗(或生物素)处理、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处理、清洗等步骤。
  3.加入适量的DAB显色液,铺满整个固相膜表面(可按比例增减)。
  4. 置于平式摇荡仪上,在室温下孵育2至5分 钟,避免光照(暗室操作),直至棕褐色沉淀出现。
  5.用镊子夹起固相膜,放进无离子水里清洗。
  6.空气中晾干。
  7. 拍照记录 。
  染色液的注意:
  1. 溶液应低温密封保存。如有结晶析出,应确保结晶完全溶解再行使用;
  2. 显色工作液应现用现配,新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色,如颜色过深,请勿使用;
  3. DAB在常温下不稳定,每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱,以免因DAB分解影响实验,或因渗漏造成实验环境污染;
  4. DAB有潜在致突变作用,操作时应注意穿戴好防护用具。

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