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选择缓冲液的原则了解
更新时间:2018-11-27   点击次数:1565次
      缓冲液通常是由「弱酸及其共轭碱」或「弱碱及其共轭酸」缓冲对所组成的溶液,能够在加入一定量其他物质时减缓pH的改变。以生物实验中常用的一种缓冲液PBS为例,是由Na2HPO4、KH2PO4组成的缓冲对,在PH5.8-8.0范围内有较强的缓冲能力。
  为了保证缓冲液有足够强的缓冲能力,在配制缓冲液时,需要做到:
  1)为使共轭酸碱对的浓度比接近于1,应根据所需要维持的pH范围选择合适的缓冲对,使其中的弱酸的PKa等于或接近于所要求的pH,例如,生物培养液中需用PH=7.0的缓冲液,已知H2PO4-的pKa2=7.21,因此,H2PO4—HPO42-是可以选择的合适的缓冲对。如若配制PH=9.0的缓冲液,则可选择NH3·H2O-NH4Cl缓冲对(pKa(NH4+)=9.25)。可见弱酸的Ka是选择缓冲液的主要依据,表中列出了几种常用的缓冲液。
  选择缓冲液的一般原则:
  避免缓冲液与蛋白质之间的不良反应
  使用低浓度避免费特异性离子强度的干扰
  缓冲液的pKa变化超过一个pH单位缓冲能力明显下降
  混合缓冲液在一定强度下往往有更宽的缓冲范围
  大多数动物细胞在37℃的生理状况下pH为7.0~7.5,而在温度下降到0℃时可达到8.0
  要根据选用的分离方法选择缓冲液:对于凝胶过滤,大多数缓冲液均适用,对于阴离子交换层析,阳离子缓冲液Tris缓冲液,对于阳离子交换和羟基磷灰石层析,阴离子缓冲液磷酸盐缓冲液。

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