缓冲液是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低pH变动的溶液.pH缓冲系统对维持生物的正常pH值和正常生理环境起到重要作用.多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动,而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化.在生物体中有三种主要的pH缓冲体系,它们是蛋白质缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及磷酸盐缓冲系统.每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。
 

　　缓冲液根据用途，一种是单纯的HEPES+NaOH，另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下：
 

　　一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
 

　　119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。
 

　　二、加少量盐的HEPES Buffer配方(500ml)
 

　　HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，较后定容。
 

　　三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制
 

　　将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M NaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。
 

　　HEPES使用方法有两种：
 

　　(1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 调pH至7.2，滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。
 

　　(2)亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L)，使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，较终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中，用lN NaOH调pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
 

　　需要注意的是，HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对细胞无毒性作用。一般情况下，浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。